Surface Viable Environmental Monitoring and Contact Plate Procedures

培训模块：表面浮游菌环境监测与接触平板规程

1. 学习目标

环境监测（EM）是在无菌生产环境中维持“受控状态”的战略基石。它提供必要的经验数据，以核实清洁规程和无菌行为正在有效地将微生物风险降至最低。通过定量表面、设备和人员上活性微生物的存在，EM 充当关键的早期预警系统，以在污染到达产品之前加以防止。

完成本模块后，受训者将能够：

• 演示 执行表面接触接种的正确无菌操作技术，确保琼脂表面绝不暴露于落下的颗粒物。
• 执行 使用“滚动动作”进行适当的位点取样，以确保最大程度地回收活性微生物而不损害培养基表面。
• 区分 胰酪大豆琼脂（TSA）和Sabouraud 葡萄糖琼脂（SDA）培养基，依据具体的监测要求（常规与真菌学）。
• 识别 平板受损时所需的强制措施，包括重新取样以及将受损样品送至实验室。

实现这些目标对于无菌保证至关重要。您以技术精确度执行这些规程的能力确保了我们环境数据的完整性，这直接影响我们保护产品和患者安全的能力。

2. 为何这在现场至关重要

环境监测是我们污染控制策略的基本支柱；它不仅仅是一项文件记录工作。它是用于评估生产环境健康状况的关键诊断工具。在无菌生产的背景下，“那又如何？”很清楚：未能准确监测表面可能导致未被察觉的微生物生长。这可能导致非无菌产品批次，对患者构成灾难性风险，并可能导致产品损失和法规干预。

本规程旨在提供“无菌保证”。通过完全按照这些步骤操作，您提供证据，证明我们的洁净分级区域保持在所需的微生物限度之内。在厂房现场，您是第一道防线；您在取样中的精确性确保任何偏离受控状态的情况都被立即识别并整改。

3. 关键术语和定义

在 GMP 环境中，精确的术语是“合规的语言”。一致地使用这些术语确保所有人员——从现场到实验室——对要求和结果有共同的理解。

环境监测的基本 GMP 词汇

掌握这一词汇是成功执行规程的第一步。

4. 分步规程

成功的环境监测在很大程度上依赖于“无菌操作技术”。以下顺序经过战略性设计，以防止引入外部污染，同时确保样品准确反映被测表面的洁净度。

4.1 拆包与准备

1. 取出平板： 从冷藏处取出所需数量的接触平板。
2. 培养基选择：
   • 选择含卵磷脂和聚山梨酯 80 的TSA 用于常规监测。
   • 选择含卵磷脂和聚山梨酯 80 的SDA 用于真菌学监测。
   • 理由： 不同的微生物需要特定的养分；选择正确的培养基可确保我们捕获目标污染物。
3. 核实： 核查有效期。平板可使用至有效期当日，含当日。
4. 消毒： 进入洁净分级区域时，对外包装消毒。对于双层/三层包装的平板，去除外层并将平板放入已消毒的容器中。
   • 理由： 这可防止污染物从较低洁净分级区域转移到更洁净的环境中。
5. 检查： 目视检查平板。如果存在裂纹或缺口等损坏，在使用前标记并丢弃这些平板。

4.2 位点取样技术

1. 标记： 用位点名称标记平板。对于更衣资格认证 或关键操作，注明检测是针对 API 还是初级生产，并包含接受资格认证人员的签名缩写。
2. 无菌打开： 握住平板边缘；用另一只手取下盖子。
   • 理由： 正确的手部放置可防止手指接触琼脂。
3. 握持与定向： 在整个取样过程中，使琼脂表面朝下。使盖子内侧朝下。
   • 理由： 这可防止空气中颗粒物沉降到无菌琼脂或盖子内侧。
4. 施加： 使用滚动动作 将平板轻压在表面上。
   • 理由： 滚动动作可确保完全接触。必须避免摩擦，因为它会损坏琼脂表面，产生物理伪影或“蔓延菌落”，使评价期间无法进行 CFU 计数。
5. 受损样品： 如果平板受损（例如取样期间掉落或琼脂表面损坏），立即重新取样该位点。
   • 关键要求： 即使平板受损，也必须 将其保留、记录并送至 QC 微生物进行培养。将损坏情况通知区域管理层。
6. 关闭： 立即将平板盖回其盖子。

4.3 取样后、清洁与装袋

1. 位点消毒： 用浸有 70% IPA 的非脱屑 擦拭巾，以单向、重叠的动作擦拭取样区域。对于人员，向位点喷洒 70% IPA。
   • 理由： 这可去除培养基残留物（卵磷脂和聚山梨酯 80），否则可能在设备或更衣物上助长微生物生长。
2. 平板定向： 将平板堆叠，琼脂表面朝下，盖子在底部。
3. A 级和隔离器要求： 在 A 级区域采集的平板必须无菌装袋。对于隔离器平板，将这摞平板倒置，将无菌袋套在其上，然后翻转至正面朝上，使琼脂保持朝下。
   • 理由： 这在为关键环境样品提供额外污染屏障的同时，维持“琼脂朝下”的定向。

4.4 培养与评价

平板必须送至 QC 微生物并在采集后 24 小时内培养。

5. 审核员或检查员关注的内容

在 GMP 环境中，黄金法则是：“如果没有记录，就等于没有发生。” 卫生当局检查员寻找清晰、连贯的证据链。

审核目标清单

• 培养基完整性： 是否检查了平板是否损坏？是否有丢弃裂纹/缺口平板的记录？
• 可追溯性： 平板标签是否与 LIMS 批号和具体位点相符？
• 更衣记录： 所有更衣资格认证样品是否都有人员签名缩写？
• 培养合规： 培养是否在 24 小时窗口内开始？
• 受损平板文件记录： 如果平板受损，LIMS 中是否有相应的标注，以及该平板仍被送去培养的证据？

6. 常见错误及避免方法

EM 中的错误往往是不良习惯的结果。我们将这些视为专业成长所必需的“可指导的习惯”。

7. 知识检查

1. 哪种培养基专门用于真菌学（真菌）监测？
   • A) 含卵磷脂和聚山梨酯 80 的 TSA
   • B) 70% IPA
   • C) 含卵磷脂和聚山梨酯 80 的 SDA
   • D) LIMS
2. 如果平板在取样期间损坏或受损，正确的措施是什么？
   • A) 丢弃平板并跳过该位点。
   • B) 重新取样该位点，记录损坏情况，并将受损平板送至 QC 进行培养。
   • C) 重新取样该位点并丢弃受损平板。
   • D) 继续使用受损平板且不重新取样。
3. 平板应以何种定向存放在周转箱中？
   • A) 琼脂表面朝上。
   • B) 琼脂表面朝下，盖子在底部。
   • C) 垂直放置。
   • D) 仅 A 级区域需要定向。
4. 简答： 为什么在规程完成后必须用 70% IPA 擦拭取样表面？
5. 简答： TSA 平板的培养要求（时间和温度）是什么？

答案要点

1. C （第 4.1 节）
2. B （第 4.2 和 4.4 节）
3. B （第 4.3 节）
4. 答案： 为去除可能在生产设备或更衣物上助长微生物生长的培养基残留物（卵磷脂/聚山梨酯 80）（第 4.3 节）。
5. 答案： 30 至 35°C 下 ≥ 72 小时（第 4.4 节）。

8. 岗位胜任力衔接

本规程是QC 微生物学 和DP-MFG-FACILITY（生产运营） 人员的核心能力。

招聘经理期望较高水平的“胜任就绪”，其中包括：

• 无菌心态： 持续关注手部放置和平板定向，以保护样品的完整性。
• 对细节的关注： 对更衣资格认证进行细致标记，并仔细检查培养基。
• 文件完整性： 理解即使是受损样品也必须有所交代并送至实验室。

通过掌握本 SOP，您确保生产到 QC 的监管链保持不间断，从而维护最高的无菌保证标准。