Qualitative Air Monitoring Using Settling Plates

培训模块：使用沉降平板进行定性空气监测

1. 学习目标

清晰的学习目标是 cGMP 环境中员工准备就绪的基础，因为它们消除了歧义，确保每一位团队成员都理解保护产品完整性所需的精确标准。在无菌生产环境中，“差不多”永远不可接受；这些目标为能力提供了可衡量的框架，使受训者能够从理论理解转向一致、合规的执行。通过确切界定成功的样子，我们确保所采集的环境监测数据既准确又可辩护。

完成本模块后，受训者将能够：

• 选择适当版本的胰酪大豆琼脂（TSA）——包括含卵磷脂/聚山梨酯 80 或丙酮酸盐以中和消毒剂的变体——并为进入洁净分级区域作好准备。
• 执行无菌取样规程，包括将平板正确放置在工作 12 英寸范围内以及维持四小时最长暴露限度。
• 演示 A 级和 ISO 5 环境平板为维持样品完整性所需的专用装袋和定向技术。
• 管理取样后要求，包括在 LIMS 中记录时间数据以及在所需的 24 小时窗口内启动培养。

这些目标充当您培训的路线图，弥合书面规程与您将在生产现场执行的关键实体动作之间的差距。

2. 为何这在现场至关重要

维持“洁净分级洁净室”是无菌生产中的一项战略必需。这些环境对灰尘、雾化颗粒和空气中微生物进行严格控制，以确保我们所创造的产品保持无污染。空气监测是我们用来核实这些控制按预期运作的主要机制。若没有严格的监测，我们实质上是在黑暗中运营，无法证明产品周围的空气是安全的。

沉降平板通过专门针对“活菌”——可能损害某批次的活性微生物——在这一污染控制策略中发挥着重要作用。关于患者安全的“那又如何？”是严峻的：如果 A 级或 B 级区域中存在空气中微生物且未被察觉，它们可能进入产品流，可能导致患者发生危及生命的感染。通过使用胰酪大豆琼脂（TSA）平板捕获这些微生物，我们提供高水平的无菌保证，证明环境在生产的确切窗口期内符合所需的微生物限度。

这些规程的精确性正是使我们能够为生产的每一剂药品的安全性背书的关键所在。这引导我们了解您必须掌握的、以正确执行本规程的特定术语和定义。

3. 关键术语和定义

在无菌生产中，精确的词汇既是法规要求，也是安全要求。使用标准化术语可确保微生物学、质量保证和生产之间的沟通无瑕，防止可能导致数据完整性失败或产品污染的错误。

• BSC（生物安全柜）： 一种通风柜，为物料处理提供受控环境。
• 洁净分级洁净室： 一种污染物水平（灰尘、颗粒、微生物）受控的环境，按颗粒计数和内部活动的关键性进行分级。
• CFU（菌落形成单位）： 用于估算样品中活菌或真菌细胞数量的单位。
• HLF（水平层流）： 水平横穿工作区的、稳定的单向过滤空气流。
• LIMS（实验室信息管理系统）： 用于记录、跟踪和管理实验室样品和数据的数字系统。
• 管理界线： 未在现有资料中涵盖。
• SDA（Sabouraud 葡萄糖琼脂）： 一种用于真菌（酵母和霉菌）分离的生长培养基。
• TSA（胰酪大豆琼脂）： 一种用于培养多种微生物的通用生长培养基。
• 活的： 有能力生存和生长的微生物。
• 样品采集： 在所需取样期结束后关闭沉降平板盖子的具体结束时间。

牢固掌握这些定义至关重要，因为我们将从实体监测规程的“是什么”转向“如何做”。

4. 分步规程（每个步骤背后的“为何”）

逐字遵循标准操作规程（SOP）对于确保数据完整性和产品安全至关重要。任何偏离既定步骤的情况都会在我们的记录中制造“缺口”，从而可能使整个生产批次无效。本规程旨在控制取样过程每个阶段的环境风险。

第 1 阶段：取样平板准备

1. 从冷藏处取出 TSA 平板： 选择正确的培养基变体（TSA、含卵磷脂和聚山梨酯 80 的 TSA，或含丙酮酸盐的 TSA）。
   • 为何重要： 选择对于中和残留消毒剂至关重要。使用错误或过期的培养基可能无法支持微生物生长，导致假阴性结果。
2. 对外包装消毒： 在进入洁净分级区域或跨越管理界线时，对平板包装外部消毒。
   • 为何重要： 这可防止将低级别区域“搭便车”的微生物引入洁净室。
3. 目视检查： 在使用前检查平板是否有裂纹或缺口。
   • 为何重要： 受损的平板可能损害培养基的无菌性或干扰准确的菌落计数。

第 2 阶段：取样规程

1. 记录开始时间： 立即在平板盖子上和 LIMS 中记录开始时间。
   • 为何重要： 准确的计时是核实 4 小时暴露限度所必需的；若无计时，样品无效。
2. 无菌放置： 将平板放置在工作 12 英寸范围内并取下盖子，使其面朝下放置。
   • 为何重要： 使平板靠近操作可确保它捕获最可能影响产品的空气；将盖子面朝下放置可防止环境沉降物污染盖子内侧。
3. 监测持续时间（4 小时规则）： 暴露时间不得超过四小时。如果操作时间更长，请在关闭当前平板之前打开新平板以确保连续监测。
   • 为何重要： 长时间暴露会导致琼脂脱水，从而导致培养基生产力丧失。这是一项法规失败，其中琼脂不再能支持我们试图检测的微生物的生长。
4. 结束取样： 盖回盖子，并在平板上和 LIMS 中记录结束时间（样品采集）。
   • 为何重要： 这界定了生产批次环境监督的精确窗口。

第 3 阶段：取样后与培养

1. 无菌装袋（A 级/ISO 5）： 对于隔离器平板，将这摞平板倒置，将无菌袋套在其上，然后翻转至正面朝上。在从操作罩中取出之前，用胶带/袋封固。
   • 为何重要： 这一专用技术确保平板外部在运输期间不受外部环境影响。
2. 运输定向： 将平板堆叠，琼脂表面朝下，盖子在底部。
   • 为何重要： 这可防止冷凝水滴落到琼脂表面。如果冷凝水滴落，可能导致“蔓延菌落”，从而产生“数不胜数” （TNTC）读数，这实质上使样品无效。及时培养：
3. 平板必须在采集后 24 小时内在 LIMS 中接收并放入培养箱。为何重要：
   • 培养延迟可能导致活性微生物的丧失，从而产生不准确的环境数据。培养参数：
4. 将 TSA 平板在 30 至 35 °C 下培养至少 3 天。为何重要：
   • 这些特定条件经过优化，以促进有人员的洁净室中最常见微生物的生长。法规注释：

具体的法规引用未在现有资料中涵盖。严格遵守这些步骤可确保我们提供给检查人员的数据准确且完整。

5. 审核员或检查员关注的内容

在法规审核员看来，箴言很简单：“如果没有记录，就等于没有发生。”在检查期间，检查人员将使用

审计追踪 来核实规程被毫无例外地遵循的实体和数字证据。检查人员将核实的具体项目包括：

时间一致性与数据完整性：

• 核实 LIMS 中的开始和结束时间与生产日志一致。审核员特别核查“陈旧数据录入” （事后记录时间）与“实时录入” 的对比，以确保同步文件记录。24 小时窗口：
• 验证“样品采集”时间和“培养开始”时间在强制性的 24 小时限度之内。平板完整性记录：
• 检查 LIMS 标注，以确保平板在使用前和实验室接收时都进行了裂纹目视检查。连续监测证据：
• 对于超过四小时的操作，交叉参照时间，以确保新平板在旧平板关闭之前 打开。培养合规：
• 确认 TSA 平板在培养箱中保留了完整的持续时间（≥ 3 天）且在所需温度范围内（30 至 35 °C）。理解这些审核要点有助于我们避免常常导致负面发现项的常见人为错误。

6. 常见错误及避免方法

“人为因素”是洁净室运营中最重要的变量。即使是最有经验的技术员也可能陷入损害无菌完整性的习惯。自我纠正和正念是您维持合规的最佳工具。

错误：将盖子“面朝上”放在工作表面上。

• 专业提示：
  • 养成一个习惯：在您看到“洁净面”朝向台面之前，绝不放开盖子。这可防止空气中颗粒沉降到盖子内侧并被转移回平板。错误：在连续监测期间忘记“重叠”。
• 专业提示：
  • 设置一个 3 小时 45 分钟的“分阶段计时器”。这为您提供了一个 15 分钟的窗口，以在第一个平板必须关闭之前无菌地打开替换平板。错误：装袋定向不正确。
• 专业提示：
  • 记住“重力翻转”。通过将袋子套在倒置的这摞平板之上，您可确保袋子内部保持无菌，且平板在离开 ISO 5 环境之前已被封固。错误：丢弃来自失败设置或批次重启的平板。
• 专业提示：
  • 这是一个“绝不允许事件”。 如果平板已被打开，则必须培养。环境监测文件记录中没有“重来”；空气暴露的每一秒都必须有所交代。错误：错过 24 小时培养截止期限。
• 专业提示：
  • 将“样品采集”视为倒计时。在班次结束后，始终立即优先处理运输和 LIMS“接收”步骤，以确保实验室有最长的时间来启动培养。7. 知识检查

能力评估是 cGMP 培训的关键组成部分。它确保本模块中获得的知识得到保留，并能正确应用以保护生产环境。

问题：

沉降平板在必须更换之前，最长可暴露于空气中多长时间？

1. a) 2 小时 b) 4 小时 c) 8 小时 d) 24 小时平板必须在“样品采集”后多少小时内放入培养？
2. a) 4 小时 b) 12 小时 c) 24 小时 d) 48 小时TSA 平板所需的培养参数是什么？
3. a) 20-25 °C 下 ≥ 5 天 b) 30-35 °C 下 ≥ 3 天 c) 37 °C 下 24 小时 d) 室温下 7 天简答：
4. 如果某批次重启并需要连续监测 6 小时，应如何处理沉降平板之间的过渡以满足“无菌重叠”的要求？简答：
5. 描述对来自 A 级隔离器的平板进行装袋的具体步骤。答案要点：

b) 4 小时。

1. （来源：规程一节——“在不超过四小时后，将盖子盖回平板上……”）c) 24 小时。
2. （来源：培养一节——“培养必须在采集后 24 小时内进行。”）b) 30-35 °C 下 ≥ 3 天。
3. （来源：培养一节——“将 TSA 平板在 30 至 35 °C 下培养 ≥ 3 天。”）答案：
4. 您必须在关闭当前平板之前打开新平板。这就形成了无菌重叠，确保在操作期间关键环境零秒 不受监测。（来源：取样规程——“在关闭当前平板之前打开新平板。”）答案：
5. 将这摞平板倒置，将一个打开的无菌袋套在这摞平板上，然后在袋内小心地将这摞平板翻转至正面朝上并封口。（来源：取样规程——隔离器平板装袋）。8. 岗位胜任力衔接

在 Zentrum24 及类似的无菌设施中，本模块所概述的任务通常由

QC 微生物学 分析员或DP-Manufacturing-Facility 人员执行。这些岗位是我们洁净室完整性的前线捍卫者。招聘经理或主管将期望任何应聘者掌握

4 小时暴露限度 和无菌平板操作无菌平板操作。他们寻找认识到沉降平板不仅仅是一块塑料、而是确保患者安全的高精度工具的人。展示您理解“如何做”背后的“为何”——例如“培养基生产力丧失”的风险或 24 小时培养窗口的重要性——标志着您是一名为 cGMP 环境的严格要求做好准备的专业人员。

定性空气监测培训模块到此结束。每一步的准确性确保每一剂药品的安全。

Zentrum24 培训计划